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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時間：2018-03-14 作者：佚名 來源：網(wǎng)絡(luò)整理
對蝦白斑綜合癥病毒（WhiteSpotSyndromeVirus，wssv）病是全世界范圍內(nèi)對養(yǎng)殖對蝦危害最大的病毒病。迄今為止，學(xué)者們對引起該病的病毒命名尚不統(tǒng)一，有白斑桿狀病毒（WhiteSpotBac-ulovirus，WSBV）、皮下及造血組織壞死病桿狀病毒（HepodermalandHematopoietieNecroisisBacu-lovirus，HHNBV）、日本對蝦桿狀病毒（Rod-shapednuclearVirusofPenacusJaponicus，RV-PJ）和系統(tǒng)外胚層和中胚層桿狀病毒（SystemicEc-todermalandMesoderrnalBaculovirus，SEMBV）等。所有這些病毒均被認(rèn)為屬于桿狀病毒科的無包涵體桿狀病毒亞群。在第六次國際病毒分類會議（ICTV）報告中取消了以上命名，具體命名待定，按照Lightener的意見將其暫時命名為白斑綜合癥病毒（wssv）。我國自1993年暴發(fā)此病以來，每年都發(fā)生對蝦大規(guī)模毀滅性死亡，幾乎所有養(yǎng)殖蝦類皆可被其感染。WSSV毒力較強(qiáng)，3～10天內(nèi)被浸染者的累積死亡率達(dá)100.0%。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）2000年將其列為“需要作報告的疾病之一”。鑒于WSSV尚未有有效的治療方法，快速準(zhǔn)確的病原分離檢測技術(shù)已成為研究的焦點之一。本文就對蝦白斑綜合癥病毒（wssv）的檢測技術(shù)作一綜述，以供參考。
1直接觀察法
直接觀察法是根據(jù)養(yǎng)殖過程中對蝦急性和慢性死亡的情況，對照白斑綜合癥的典型癥狀作出判斷。如頭胸甲出現(xiàn)白斑、甲殼變軟易剝離等，這種方法主要是根據(jù)實踐經(jīng)驗判斷，且必須是對蝦感染病毒致死后才能發(fā)現(xiàn)。
2組織化學(xué)法與電子顯微鏡技術(shù)
組織化學(xué)法是取對蝦的各種組織用適當(dāng)?shù)娜旧夹g(shù)在光鏡下進(jìn)行檢測。主要有H-E染色和T-E染色等。莫照蘭等（2000）曾用H-E染色感染W(wǎng)SSV病毒的螯蝦的鰓和胃組織，在光鏡下觀察病變組織與對照組呈現(xiàn)差異顯著，組織結(jié)構(gòu)松散殘缺呈壞死狀態(tài)。黃傻等首創(chuàng)一種用于現(xiàn)場診斷的T-E染色方法，整個檢測過程只需要10分鐘左右，具有快捷、簡單、方便等優(yōu)點，但是，這種方法對操作技術(shù)要求高，而且由于對蝦可能終生帶毒而不發(fā)病，因此，即使檢測到病毒也不能確認(rèn)一定會發(fā)病。相對而言電子顯微鏡觀察更為準(zhǔn)確，可直接觀察到病毒的形態(tài)和大小。吳友呂等（1995）曾用電鏡在對蝦體內(nèi)檢測到WSSV。姜明等（1996）對中國對蝦在病害暴發(fā)期間病蝦肝胰臟、鰓、腎和腸組織進(jìn)行固定切片，在透射電鏡蝦觀察到桿狀病毒的3種存在形態(tài)。莫照蘭等（2002）對螯蝦人工感染W(wǎng)SSV病毒并取鰓和胃用固定液固定，制成超薄切片在電鏡下觀察到WSSV的病毒粒子。謝數(shù)濤等（2000）純化WSSV病毒并負(fù)染后在電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)病毒的精細(xì)結(jié)構(gòu)。Nunan等（1998）和Zhan等（1998）也曾對對蝦人工感染W(wǎng)SSV進(jìn)行了電子顯微鏡觀察。組織化學(xué)與電子顯微鏡技術(shù)都是在病毒大量增殖后才能觀察到，當(dāng)感染早期或處于潛伏期病毒量小時，則難以觀察到。
3免疫學(xué)檢測技術(shù)
免疫學(xué)檢測技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)建立的，方法多種多樣，主要用于快速鑒定。單克隆抗體和多克隆抗體的制備是進(jìn)行檢測的必需工作。單克隆抗體技術(shù)是隨著雜交瘤細(xì)胞建立而發(fā)展起來的，可以產(chǎn)生對特異決定簇的特異抗體。優(yōu)點是制備抗體時抗原不需高度純化、特異性強(qiáng)；缺點是制備繁瑣、試驗條件嚴(yán)格、易漏檢。多克隆抗體來源于抗血清，含所有抗原決定簇的抗體，易發(fā)生交叉反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性，特異性不強(qiáng)，一般不用于對蝦病毒的檢測。
對蝦病毒的檢測一般采用單克隆抗體，常用酶聯(lián)免疫吸附分析（EIJSA）實驗。酶聯(lián)免疫吸附分析是目前發(fā)展最快的免疫標(biāo)記技術(shù)，具有靈敏、快速、易操作、可定量等優(yōu)點，應(yīng)用廣泛。于佳等（1995）將WSSV病毒注射小鼠，用免疫后的脾細(xì)胞與Sp2/O骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出了可用于WSSV檢測的單克隆抗體。黃
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